Il introduit à la cour du roi de France le tabac (surnommé l'herbe à Nicot ou "herbe à la Reine"), qui se prise uniquement à l'époque.

Celui-ci a la chance de soigner les migraines de Catherine de Médicis.

En reconnaissance de ses services rendus à la France, le roi le fait seigneur de Villemain, une petite cure située dans l'est parisien non loin de Brie-Comte-Robert.

Nicot a laissé son nom à la nicotine.

Mais son œuvre principale reste le premier dictionnaire moderne de la langue française.

A la mort de son ami le président Aimar de Ranconnet en 1559, il se mit en effet en devoir de compléter les notes lexicales amassées par celui-ci.

Son dictionnaire par ordre alphabétique Thresor de la langue françoyse tant ancienne que moderne, publié après son décès en 1606, est considéré comme l'ouvrage fondateur de la lexicographie française.